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關(guān)于我們首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 細(xì)胞生物學(xué) > 膜電位染色 > FS1166JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒
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  • JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒
  • 型號(hào):FS1166
  • 報(bào)價(jià):840
  • 地區(qū):上海市
  • 0
  • JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以JC-1為熒光探針,快速且靈敏的檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化線(xiàn)粒體膜電位變化的試劑盒。因線(xiàn)粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。因此本試劑盒可用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。
  • 021-34600120
產(chǎn)品詳細(xì)介紹

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

JC-1 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一種以JC-1為熒光探針,快速且靈敏的檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化線(xiàn)粒體膜電位變化的試劑盒。因線(xiàn)粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。因此本試劑盒可用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線(xiàn)粒體膜電位Ψm 位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢(shì)依賴(lài)性的方式積聚在線(xiàn)粒體內(nèi),可以用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。正常線(xiàn)粒體內(nèi),JC-1聚集在線(xiàn)粒體基質(zhì)中形成聚合物,聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的線(xiàn)粒體由于膜電位的下降或喪失,JC-1 只能以單體的形式存在于胞漿中,產(chǎn)生綠色熒光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。JC-1 不僅可用于定性檢測(cè),因顏色的變化可以非常直接的反映出線(xiàn)粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測(cè),因線(xiàn)粒體的去極化程度可以通過(guò)紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來(lái)衡量。

產(chǎn)品組成

 

編號(hào)

組分名稱(chēng)

規(guī)格

保存方法

FS1166-A

JC-1200×

5×100μl

-20℃避光,避免反復(fù)凍融

FS1166-B

JC-1 染色緩沖液(

80ml

-20℃或 4

FS1166-C

超純水

90ml

-20℃或 4

FS1166-D

CCCP10mM

20μl

-20

說(shuō)明書(shū)

保存及運(yùn)輸-20℃避光干燥保存,至少1年有效。運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸

使用方法 JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

1. JC-1 染色工作液制備

對(duì)于六孔板,本試劑盒可檢測(cè)100個(gè)樣品。每孔所需JC-1染色工作液的量為1ml,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每 50100萬(wàn)細(xì)胞需 0.5mL JC-1 染色工作液。 取適量 JC-1200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋 JC-1。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1。然后再加入 2mL JC-1 染色緩沖液(),混勻后即為 JC-1 染色工作液。

【注意】:必須先把 JC-1200×)用超純水(試劑盒提供)充分溶解混勻后,才可加入 JC-1 染色緩沖液()。不可先配制 JC-1 染色緩沖液()再加入 JC-1200×),這樣 JC-1 會(huì)很難充分溶解,會(huì)嚴(yán)重影響后續(xù)的檢測(cè)。

2. 陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置

CCCP10mM)推薦按 11000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至 10μM,處理細(xì)胞 20min。隨后按照下述方法裝載 JC-1,進(jìn)行線(xiàn)粒體膜電位的檢測(cè)。 對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常 10μM CCCP 處理 20 min 后線(xiàn)粒體的膜電位會(huì)wanquan喪失,JC-1 染色后觀(guān)察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng) JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能

有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。

3. 對(duì)于懸浮細(xì)胞

1)取1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。

2)加入0.5mL JC-1染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37℃孵育 20min。

3)孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的 JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。

437℃孵育結(jié)束后,600×g4℃離心 34min 沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。

5)用 JC-1 染色緩沖液()洗滌 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600×g4℃離心 34min沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600×g4℃離心 34min 沉淀細(xì)胞,棄上清。

6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察,也可以用熒光分光 光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。

4. 對(duì)于貼壁細(xì)胞

【注意】:對(duì)于貼壁細(xì)胞,如果希望采用熒光分光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測(cè),可以先收集細(xì)胞,重懸后參考懸浮細(xì)胞的方法進(jìn)行檢測(cè)。

1)對(duì)于六孔板的一個(gè)孔,吸除培養(yǎng)液,根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)如有必要可用 PBS 或其它適當(dāng)溶液洗滌細(xì)胞一次,加入 1mL 細(xì)胞培養(yǎng)液。細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。

2)加入 1mL JC-1 染色工作液,充分混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37℃孵育 20min

3)孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的 JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。

437℃孵育結(jié)束后,吸除上清,用 JC-1 染色緩沖液()洗滌 次。

5)加入 2mL 細(xì)胞培養(yǎng)液,培養(yǎng)液中可以含有血清和酚紅。

6)熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察。

5. 對(duì)于純化的線(xiàn)粒體

1)將配制好的 JC-1 染色工作液再用 JC-1 染色緩沖液()稀釋 倍。

20.9mL 5 倍稀釋的 JC-1 染色工作液中加入 0.1mL 總蛋白量為 10100μg 純化的線(xiàn)粒體。

3)用熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè):混勻后直接用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行時(shí)間掃描(time scan),激發(fā)波長(zhǎng)為485nm,發(fā)射波長(zhǎng)為 590nm。如果使用熒光酶標(biāo)儀,激發(fā)波長(zhǎng)不能設(shè)置為 485nm 時(shí),可在475520nm范圍內(nèi)設(shè)置激發(fā)波長(zhǎng)。另外,也可以參考下面步驟 中的波長(zhǎng)設(shè)置進(jìn)行熒光檢測(cè)。

4)用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察:方法同下面的步驟 6。

6. 熒光觀(guān)測(cè)和結(jié)果分析

檢測(cè) JC-1 單體時(shí)可以把激發(fā)光設(shè)置為 490nm,發(fā)射光設(shè)置為 530nm;檢測(cè) JC-1 聚合物時(shí),可以把激發(fā)光設(shè)置為 525nm,發(fā)射光設(shè)置為 590nm。

【注1:此處測(cè)定熒光時(shí)不必把激發(fā)光和發(fā)射光設(shè)置在最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)。如使用熒光顯微鏡觀(guān)察,檢測(cè) JC-1 聚合物時(shí)可使用常來(lái)檢測(cè)碘化丙啶或者 Cy3 用的標(biāo)準(zhǔn)帶通濾波器。檢測(cè) JC-1 單體可使用常來(lái)檢測(cè) FITC  GFP 的標(biāo)準(zhǔn)帶通濾波器。出現(xiàn)綠色熒光說(shuō)明線(xiàn)粒體膜電位下降,并且該細(xì)胞很可能處于細(xì)胞凋亡早期。出現(xiàn)紅色熒光說(shuō)明線(xiàn)粒體膜電位比較正常,細(xì)胞的狀態(tài)也比較正常。

注意事項(xiàng)

1JC-1200×)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以 2025℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

2)裝載完 JC-1 后用 JC-1 染色緩沖液()洗滌時(shí),使 JC-1 染色緩沖液()保持 4℃左右,此時(shí)洗滌效果較好。

3JC-1 探針裝載完并洗滌后盡量在 30min 內(nèi)完成后續(xù)檢測(cè)。在檢測(cè)前需冰浴保存。

4)請(qǐng)勿把JC-1染色緩沖液()全部配制成JC-1染色緩沖液(,本試劑盒使用過(guò)程中需直接使用JC-1 染色緩沖液()。

5)如果發(fā)現(xiàn) JC-1 染色緩沖液()中有沉淀,必須全部溶解后才能使用,可在 37℃加熱促進(jìn)溶解。

6CCCP 為線(xiàn)粒體電子傳遞鏈抑制劑,有毒,請(qǐng)注意小心防護(hù)。

7)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

FS1164

JC-1 (5 mg/ml in DMSO) 線(xiàn)粒體膜電位熒光探針(5 mg/ml in DMSO

200μl (1mg)

FS1165

JC-1 線(xiàn)粒體膜電位熒光探針

1mg

FS1166

JC-1 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

100T

FS1167

JC-10 (2mg/ml in DMSO) 線(xiàn)粒體膜電位熒光探針(2mg/ml in DMSO

500ul

FS1169

JC-10 線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

100T

FS1179

CCCP (50 mM) 凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體

100ul

FS1180

FCCP (50 mM) 凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體

100ul



JC-1JC-1部分引用文獻(xiàn) JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

(1) [IF=9.7]Contribution of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression-EBioMedicine Published:January 27, 2022 DOI:https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

此圖的原始數(shù)據(jù)出自文獻(xiàn)(1)中。

(2) [IF=11.4]VDR regulates mitochondrial function as a protective mechanism against renal tubular cell injury in diabetic rats.  -Redox Biology -Volume 70, April 2024, 103062.V

JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

 

此圖的原始數(shù)據(jù)出自文獻(xiàn)(2)中。

(3)[IF=11.1]LONP1 targets HMGCS2 to protect mitochondrial function and attenuate chronic kidney disease-EMBO Mol Med(2023)15: e16581 https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

JC-1線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)試劑盒

                                             免疫熒光共定位分析mPTC(上,標(biāo)尺:20um)和人腎組織(下,標(biāo)尺:200um)中LONP1、HMGCS2和線(xiàn)粒體。

 

 此圖的原始數(shù)據(jù)出自文獻(xiàn)(3)中。


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