產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
FS0351-100MG | Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K | 100mg | 200.00 |
FS0351-500MG | Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K | 500mg | 800.00 |
FS0351-1G | Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K | 1g | 1200.00 |
產(chǎn)品描述
蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中純化得到。該酶有兩個(gè)ca2+結(jié)合位點(diǎn),它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機(jī)理并無(wú)直接關(guān)系。然而,如果從該酶中除去ca2+,由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以,蛋白酶k消化過(guò)程中通常加入edta(以抑制依賴(lài)于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對(duì)蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白,如角蛋白一類(lèi),則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+。
蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而它應(yīng)用很廣泛,包括制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4-12.5)均有活性。
推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
[注]!蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn):20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
產(chǎn)品屬性
CAS : 39450-01-6
分子量 : 28.9 kDa
英文名稱(chēng) : Proteinase K
外觀(性狀) : 凍干粉
儲(chǔ)存條件 : -20℃,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。
活力:40mAnsom u/mg
性狀:粉末,是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,來(lái)源于白色念球菌(. Tritirachium album. ),具有很高的比活性。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶K失活,反而增強(qiáng)和穩(wěn)定酶活性,并在較廣的PH范圍內(nèi)(PH4-12.5)均有活性。在組織或細(xì)胞核酸分離時(shí),使核酸酶(RNA和DNA)以及反應(yīng)中其他酶失活。
產(chǎn)品應(yīng)用
用途:生化研究。廣譜蛋白酶,95C加熱10分鐘,則*失活??商娲鶧EPC處理RNA抽提用的離心管和 頭,實(shí)現(xiàn)滅活RNase A的目的,也用于處理RNase-Free的水。充分降解組織或細(xì)胞中蛋白質(zhì)分子特別是核酸,以達(dá)到釋放和萃取高質(zhì)量核酸的輔助試劑。用于質(zhì)粒或基因組DNA、RNA的分離以及蛋白多肽印跡實(shí)驗(yàn)。
蛋白酶k的作用
值得注意的是,蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào).但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問(wèn)題,并能達(dá)到理想的染色效果.
孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
用途:本品僅供科研,不得用于其它用途。
蛋白酶K(核酸純化與電泳) 蛋白酶K(核酸純化與電泳)