1、CST抗體是否適用于全組織樣本裂解物?
答:CST 并未測試所有抗體是否適用于全組織樣本裂解物,但是 CST 的很多抗體已經被其他客戶用于整個組織而且取得成功。
2、CST抗體可用于免疫組化嗎 ?
答:檢測抗體是否可用于福爾馬林固定石蠟包埋樣本,是CST 的一項常規(guī)檢測。那些通過嚴格驗證標準的抗體才會被推薦用作 IHC-P。我們也在新鮮冰凍組織樣本上檢測抗體,那些染色成功的才會被推薦用作 IHC-F。那些推薦應用里面沒有列出 IHC-P 或者 IHC-F 的,可能已經失敗,或者沒有被檢測,或者我們沒有用作檢測的特別的組織樣本。建議你 CST,我們可能有該抗體在其它系統(tǒng)表現良好的數據?;蛘?,我們可能有適用于組織染色的更好的其它產品。
3、假如說明書上某個種屬未被列出與 CST抗體有交叉反應,是否意味著這個種屬未被檢測過呢?
答:如果可能的話,CST 科學家檢測所有 CST 抗體在人、小鼠和大鼠的交叉反應性。假如我們沒有獲得某個種屬的陽性結果,我們就不會列出這個種屬。然而,有可能我們檢測的這個細胞系包含一個低水平的特定蛋白,或者,我們使用的操作對于那個特定的細胞系不起作用。因此,我們建議你比較所研究種屬和 CST 抗體驗證種屬修飾位點附近的肽段序列 ( 每邊 5 個氨基酸 )。在很多情況下,CST 抗體由免疫人的蛋白序列產生,并通過親和層析高度純化。很多時候,如果序列相同,或者在非磷酸化位點只有 1 或者 2 個氨基酸的不同時,CST 抗體很有可能識別你的蛋白。但是,我們不能保證其實驗結果。
4、使用 CST抗體時,為什么我不能使用我自己實驗室的 Western blot 操作流程?
答:CST抗體經過優(yōu)化以提供zui強的信號、zui少的背景,使用 CST 推薦的Western blot 操作流程,對于終端客戶的優(yōu)點是節(jié)約時間和材料。
5、為什么CST抗體用于 Western blot 效果不佳?
答:這里有幾個關于 CST Western blot 流程的細節(jié),對于避免丟失信號或高背景是非常關鍵的。
• 不要過度清洗膜。應在 TBS/0.1% Tween-20 中清洗三次,每次5分鐘。過度的清洗會洗掉一抗。推薦的清洗條件已經過優(yōu)化以獲得的信噪比,因此是zui強、zui干凈的結果。
• 不要過度封閉 ( 例如超過 1 小時或者過夜 )。在一些抗體中發(fā)現,過度封閉會減少特異信號。確保查閱每個產品的說明書以得到每個抗體推薦的封閉時間。
• 一般來說,針對兔多抗或兔單抗,使用抗兔二抗:#7074;針對鼠單抗,使用抗鼠二抗:#7076。
• 確認抗體的說明書上交叉反應部分有列出你所檢測的種屬。
• 確認你的上樣量達到 20 μg 細胞裂解液。
• 確認誘導的細胞裂解液樣本蛋白已活化。
如果您對于CST抗體還有其他的疑問,咨詢,我們竭誠為您解答。