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技術(shù)文章首頁 > 技術(shù)文章 使用lip3000脂質(zhì)體3000試劑,您可以獲得以下五點
  • 使用lip3000脂質(zhì)體3000試劑,您可以獲得以下五點
  • 點擊次數(shù):5906 更新時間:2019-12-26
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  •    lip3000脂質(zhì)體3000是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中,脂質(zhì)體疏水尾部伸向空氣,攪動后形成雙層脂分子的球形脂質(zhì)體,直徑25~1000nm不等。脂質(zhì)體可用于轉(zhuǎn)基因,或制備的藥物,利用脂質(zhì)體可以和細胞膜融合的特點,將藥物送入細胞內(nèi)部生物學(xué)定義:當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時,分子的疏水尾部傾向于聚集在一起,避開水相,而親水頭部暴露在水相,形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的的封閉囊泡,稱為脂質(zhì)體。藥劑學(xué)定義脂質(zhì)體(liposome):系指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體。
     
      使用試劑,您可以獲得:
      1、在多種細胞系中具有*地轉(zhuǎn)染效率和較高水平地重組蛋白表達。
      2、傳輸siRNA的優(yōu)異性能。
      3、在有血清存在的情況下可保證轉(zhuǎn)染效力——轉(zhuǎn)染后無需更換培養(yǎng)基。
      4、保證可以用于高通量應(yīng)用的試劑。
      5、用于建立穩(wěn)定細胞系的可靠試劑lip3000脂質(zhì)體3000試劑為大多數(shù)細胞提供了zui高的轉(zhuǎn)染效率和活性。當存在血清或用于進行蛋白表達的細胞系(如COS-7,CHO和293)時,lip3000脂質(zhì)體3000尤為有效,效率可超過90%。
     
      注意事項:
      要求細胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳,這有助于減少陽離子脂質(zhì)體細胞毒性造成的影響。可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,并且轉(zhuǎn)染前后不需要換培養(yǎng)基,使得操作方便了許多,但是要注意制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,因為血清會影響復(fù)合物的形成。
      復(fù)合物形成后是可以加入血清。這里要特別注意檢測所用的無血清培養(yǎng)基是否能和lip3000脂質(zhì)體3000匹配,比如已知CD293,SFMII,VP-SFM就不行。此外還應(yīng)該留意,如果研究的基因要求比較長的表達時間,比如細胞周期相關(guān)基因,或者時細胞表面蛋白,選擇細胞鋪板密較低的轉(zhuǎn)染試劑,不適合用lip3000脂質(zhì)體3000。
      對于大多數(shù)陽離子脂質(zhì)體試劑,應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽離子脂質(zhì)體試劑量以得到zui大的轉(zhuǎn)染效率。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2或者1:3,優(yōu)化可以從0.5-5之間慢慢試。使用小劑量確定的優(yōu)化條件可以用于進行大劑量的轉(zhuǎn)染,只要根據(jù)培養(yǎng)板表面比例線性增加鋪板細胞的數(shù)目、陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA量就可以了。
      還有轉(zhuǎn)染的時候培養(yǎng)基中不能添加抗生素??股?,比如青霉素和鏈霉素,一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性,使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用抗生素,甚至在準備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用抗生素。這樣,在轉(zhuǎn)染前就不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些抗生素是GENETICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外,為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,使用比含血清培養(yǎng)基更少的抗生素量。
      陽離子脂質(zhì)體應(yīng)該在4度保存,要注意避免多次反復(fù)長時間開蓋,因為可能會導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。當然還有要注意質(zhì)粒的質(zhì)量,質(zhì)粒的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵。
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